酸性磷酸酯酶動力學性質分析

米氏常數（Km）和最大反應速度（Vm）的測定

[原理]

在溫度、pH及酶濃度恒定的條件下，底物濃度對酶促反應的速度有很大的影響。在底物濃度很低時，酶促反應的速度（v）隨底物濃度的增加而迅速增加；隨著底物濃度的繼續增加，反應速度的增加開始減慢；當底物濃度增加到某種程度時，反應速度達到一個極限值（Vmax）。

底物濃度與反應速度的這種關系可用Michaelis-Menten方程式表示：

式中

v——反應速度；

Km——米氏常數；

Vmax——大畢酶反應最大速度；

[S] ——底物濃度。

從米氏方程式可見：米氏常滾敏芹數Km等于反應速度達到最大反應速度一半時的底物濃度，米氏常數的單位就是濃度單位(mol/L或mmol/L)。

在酶學分析中，Km是酶的一個基本特征常數，它包含著酶與底物結合和解離的性質。Km與底物濃度、酶濃度無關，與pH、溫度、離子強度等因素有關。對于每一個酶促反應，在一定條件下都有其特定的Km值，因此可用于鑒別酶。

測拿高定Km、Vmax，一般用作圖法求得。作圖法有很多，最常用的是Linewaver-Burk作圖法，該法是根據米氏方程的倒數形式，以1/v對1/[S]作圖，可得到一條直線。直線在橫軸上的截距為 -1/Km，縱截距為1/Vmax，可求出Km與Vmax。

米氏常數測定實驗中的注意事項有:

1. 取樣量一定要準確。 2. 反應時間一定要準確。 3. 加酶前后,試劑要混勻。 4. 參比要先加NaOH,后加酶